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基因編輯工具

· 基因編輯技術(shù)已歷經(jīng)幾代革新，從最初的ZFNs(zinc-finger nucleases)技術(shù)、TALENs (transcription activator-like effector nucleases)技術(shù)到CRISPR-Cas技術(shù)，再到BE(base editing)技術(shù)及PE(prime editing)技術(shù)等，極大地提高了人類對真核細(xì)胞的基因組進(jìn)行精準(zhǔn)改造的能力，也為治愈各類疾病提供了可能。

· 由于設(shè)計(jì)和操作方面的便捷性，CRISPR-Cas系統(tǒng)成為當(dāng)前應(yīng)用最為廣泛的基因編輯技術(shù)，此技術(shù)涉及到的核酸酶有Cas9、Cas9n、Cas12a和hfCas12Max^?等，其中Cas9在PAM序列的上游3-4bp處切割DNA，Cas12a切割雙鏈DNA后形成4-5個核苷酸突出的5’粘性末端；hfCas12Max^?也以交錯方式切割，形成5’粘性末端。

· BE技術(shù)是基于脫氨酶與CRISPR-Cas9系統(tǒng)融合形成的技術(shù)。主要有胞嘧啶堿基編輯器（CBE）、腺嘌呤堿基編輯器（ABE）等，可實(shí)現(xiàn)單個堿基對的轉(zhuǎn)換。

愷佧生物隆重推出GMP級Cas9核酸酶以及高活性的AsCas12a和hfCas12Max^?等一系列基因編輯酶！其中，Cas9核酸酶已完成DMF備案（編號：036578），并已協(xié)助客戶完成IND申報(bào)。若您使用愷佧生物Cas9核酸酶用于細(xì)胞與基因治療項(xiàng)目的藥物開發(fā)，在進(jìn)行新藥注冊的監(jiān)管備案文件中可直接引用我們的DMF 編號，從而加快藥品審查。此外，我們還可提供科研級&GMP級CBE——BS-EP1(商品名：AccuBase^?)，將C·G堿基對替換為T·A堿基對，實(shí)現(xiàn)基因的修正、激活、沉默等以達(dá)到治療疾病的目的。

Cas9 Nuclease(GMP grade)

產(chǎn)品特點(diǎn)

質(zhì)量要求

產(chǎn)品應(yīng)用

在細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域，用于造血干細(xì)胞和免疫細(xì)胞的基因修飾

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

01 純度

SEC-HPLC

Fig. 1 SEC-HPLC檢測Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%

RP-HPLC

Fig. 2 RP-HPLC檢測Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%

02 活性

體外切割活性檢測

Fig. 3 Cas9核酸酶體外切割DNA性實(shí)驗(yàn)，三批次的Cas9核酸酶的體外切割效率基本相當(dāng)。

細(xì)胞水平活性檢測

Fig. 4 Cas9核酸酶用于293T細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、T細(xì)胞的基因敲除，其在不同細(xì)胞中的基因敲除效率與競品相當(dāng)。

Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit

在ex vivo基因治療中,細(xì)胞經(jīng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)改造后，在回輸人體之前需對胞外或胞內(nèi)Cas9核酸酶的殘留進(jìn)行檢測。愷佧生物精心開發(fā)了高靈敏的殘留檢測試劑盒Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit，其靈敏度可達(dá)0.125 ng/ml。

Fig. 5 Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit檢測原理

Fig. 6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制示例

01 準(zhǔn)確度

稀釋緩沖液中加樣回收率檢測

Fig. 7 在稀釋緩沖液中檢測三個不同濃度的Cas9核酸酶分析樣本的回收率，結(jié)果顯示回收率介于80%-120%，表明試劑盒在稀釋緩沖液中檢測Cas9核酸酶的準(zhǔn)確度高。

02 精密度

使用同一批次檢測高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，每個樣本重復(fù)測試10次，結(jié)果顯示每批次試劑盒檢測不同濃度樣本的CV都小于10%，表明試劑盒具有良好的批內(nèi)重復(fù)性。

使用三批次劑盒檢檢測高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，共檢測30次，結(jié)果顯示每種樣本三個批次間的CV值都小于15%，表明試劑盒具有良好的批間重現(xiàn)性。

AsCas12a Nuclease

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

SEC-HPLC

Fig. 8 SEC-HPLC檢測AsCas12a 核酸酶的純度高于95%

體外切割活性

Fig. 9 經(jīng)體外切割實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，AsCas12a 核酸酶可以靶向切割95%以上的底物。

hfCas12Max^?

hfCas12Max^?是輝大基因（HuidaGene）開發(fā)的新型的DNA基因編輯工具酶，愷佧生物獲得hfCas12Max^?在大中華區(qū)研究級蛋白的生產(chǎn)銷售排他許可，以及GMP級產(chǎn)品的生產(chǎn)銷售普通許可。hfCas12Max^?是對xCas12i DNA編輯工具進(jìn)行蛋白工程化改造、篩選及驗(yàn)證，開發(fā)出的高保真變體，相較傳統(tǒng)的Cas9和Cas12，hfCas12Max^?具有更寬泛的PAM識別和更高效的編輯效率，且相當(dāng)或更低的脫靶效應(yīng)。

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

TIDE分析基因敲除效率

Fig.10 hfCas12Max^? RNP電轉(zhuǎn)CD3+ T細(xì)胞后，TIDE分析B2M和TRAC基因敲除效率均超過90%。

流式細(xì)胞術(shù)分析基因敲除效率

Fig. 11 經(jīng)流式檢測，由hfCas12Max^? 介導(dǎo)的基因編輯系統(tǒng)可以高效地同時敲除CD3+ T細(xì)胞中的B2M和TRAC基因，雙基因敲除效率超過90%。

BS-EP1(商品名：AccuBase^?)——新型CBE

BS-EP1(商品名：AccuBase^?)是通過基因工程手段設(shè)計(jì)的CBE，由 Cas9 Nickase、脫氨酶、UGI 融合而成，可以在 3-12 窗口范圍內(nèi)進(jìn)行有效編輯(遠(yuǎn)離 PAM 的為第1位)，將窗口范圍內(nèi)的 C 脫氨形成 U，U利用細(xì)胞內(nèi)修復(fù)機(jī)制轉(zhuǎn)變?yōu)?T，從而實(shí)現(xiàn)C→T的轉(zhuǎn)變，并且在編輯的過程中不會引入 DNA 雙鏈斷裂（Double-Strand Break，DSB），確保了編輯的安全性。
AccuBase^? 的結(jié)構(gòu)經(jīng)過巧妙的設(shè)計(jì)，創(chuàng)造性地將脫氨酶可逆的包裹起來，只有當(dāng) sgRNA 與靶位點(diǎn)結(jié)合時才能發(fā)揮脫氨作用，大幅度降低了與非靶 DNA 的隨機(jī)結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)接近零脫靶的效果，同時維持了高效的編輯活性。愷佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMS^TM平臺，通過對AccuBase^?蛋白的表達(dá)工藝、純化工藝、制劑配方開發(fā)等一系列步驟的篩選和優(yōu)化，最終制備出高穩(wěn)定性、高純度和高活性的CBE堿基編輯器。

Fig. 12 AccuBase^?工作示意圖（左:未編輯狀態(tài) 右:編輯狀態(tài)）

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

SEC-HPLC

Fig. 13 SEC-HPLC檢測 AccuBase^?純度高于80%

TIDE分析編輯效率

Fig. 14 使用AccuBase^?分別敲除原代T細(xì)胞的PDCD1, TRAC和B2M基因，經(jīng)TIDE分析，AccuBase^?對三個基因的敲除效率均超過80%。

流式細(xì)胞術(shù)分析編輯效率

Fig. 15 使用AccuBase^?分別敲除原代T細(xì)胞膜上的PDCD1, TRAC和B2M基因，經(jīng)流式分析，在蛋白水平上，AccuBase^?對PD1和B2M的敲除效率超過80%，對TRAC的敲除效率達(dá)到96%。

產(chǎn)品列表

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
KACTUS-CAS9	Cas9 Nuclease	1 mg/3 mg	立即詢價(jià)
KACTUS-CAS9-GMP	Cas9 Nuclease (GMP grade)	3 mg	立即詢價(jià)
CAS-MM00B	Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit	96 T	立即詢價(jià)
CAS-EE111	SpCas9 D10A Nickase	1 mg	立即詢價(jià)
CAS-EE121	AsCas12a Nuclease	1 mg	立即詢價(jià)
CAS-EE128	hfCas12Max^?	500 μg/1 mg	立即詢價(jià)
KD-0001	BS-EP1（Trade name: AccuBase^?）	200 μg/500 μg/1 mg	立即詢價(jià)
GMP-KD-0001	BS-EP1（Trade name: AccuBase^?), GMP grade	1 mg	立即詢價(jià)
ACB-EE00B	AccuBase^? ELISA Kit	96 T	立即詢價(jià)